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葡聚糖凝膠柱
點擊次數:827 發布時間:2011-03-09 打印本頁面 返回
(1) 預處理
稱取
葡聚糖凝膠(有不同型號)若干克,加入洗脫劑(通常為甲醇或者水,這里以甲醇為例)約20倍凝膠量,置室溫下3h進行溶脹,溶脹必須徹底,否則會使上柱后流速變慢,凝膠斷裂等。
(2) 裝柱
凝膠層析柱的直徑與柱長之比一般為1:15。柱的底部用裝有細玻璃管的橡皮塞塞緊,用洗凈的玻璃絲(約200目尼龍布)墊底或購買類似規格的商品柱。然后將柱垂直安裝好,接著將溶脹好的凝膠邊攪勻邊緩緩連續裝入,色譜柱的出口流速m維持在5~10ml/min。凝膠顆粒沉積到柱底后關緊色譜柱,等沉降到1-2cm時再2打開色譜柱。直至降到滿意高度為止,等凝膠柱內的液體留的與凝膠高度差不多時,用較小的濾紙蓋住凝膠床表面,再用洗脫劑洗脫過夜。裝柱后的凝膠必須均勻,不能有氣泡或明顯條紋。否則,必須到出重裝。
(3) 加樣
裝好的色譜柱至少要用相當于3倍保留體積的洗脫劑平衡,待洗脫劑流至與凝膠柱液面相平時(不能流干,否則會帶入氣泡),用滴管吸取樣品溶液,在高于凝膠表面約1cm處,沿管壁四周緩緩滴加樣品液,加完后打開下面的出口,使樣品滲入凝膠內。再關閉出口,用少量洗脫液將管壁殘留的樣品洗下,再打開出口,至溶液滲入柱內,再關閉出口。可以考慮再加一層薄薄的脫脂棉以保護柱表面(我一般不加),然后即可進行洗脫。
(4) 洗脫與收集
洗脫時,用甲醇作洗脫劑,并且要連續不斷地進行,使凝膠柱上端保持一定的液層,防止凝膠柱表面的液體流干。一般酸性洗脫劑中堿性物質容易洗脫,堿性洗脫劑中酸性物質容易洗脫。多糖類物質等極性大的物質考慮用水洗脫,常用的洗脫劑是水-甲醇,水-乙醇,水-丙酮等,一般根據自己樣品的性質選擇洗脫液,洗脫液可一直用單一梯度。凝膠色譜的共性是流速慢,每份一般體積較小。(內徑1.3cm左右,長80cm左右的柱子我一般每份收集液為8ml)
(5) 凝膠的再生和回收
凝膠柱多次使用后,若污染嚴重,則考慮用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl混合液浸泡后,再用水洗凈即可。 
 
通常層析柱經洗脫劑再生、平衡后,就可反復使用。但使用過多次后凝膠床體積變小,流速降低,凝膠污染雜質過多,甚至變色,需經再生后才可使用。再生方法有多種:如(1)用水進行逆向沖洗,再用洗脫劑平衡,便可重新使用。又如(2)把凝膠倒出,用6mol/L脲浸泡凝膠半小時,抽濾,再用水漂洗數次,除凈脲,必要時重復上述操作即可重新使用。
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