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從土壤中輕松獲取高質量RNA
點擊次數:1127 發布時間:2010-11-16 打印本頁面 返回

 

詳細介紹:
從土壤中輕松獲取高質量RNA
眾所周知,從土壤中提取DNA已非易事,而想從中再提取RNA可說是難上加難。DNA不容易提取是因為本身土壤中富集的材料就少,提取過程相對復雜,造成操作損失;而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外,還有一個很關鍵的原因——無處不在的RNA酶,對RNA的穩定存在構成極大威脅。另外還有一點就是土壤中某些物質的微量殘留都會影響到科研人員后期PCR反應。這就是目前國際國內市場中土壤RNA提取產品不多的原因。
    因此要想對土壤RNA有較好的提取效果,我們就必須知己知彼,既要對研究對象(土壤)熟知,又要對研究工具(試劑盒)熟悉。
土壤中重要物質腐殖質
土壤除了為陸生植物提供營養源和水分之外,還是植物生長,進行光合作用、能量交換的主要場所;同時也具有微生物生長繁殖所需要的一切營養物質及各種條件,是微生物良好的生活場所,有“微生物的天然培養基”之稱。因此土壤是一種重要的環境要素。
簡單說,土壤是由固相(礦物質、有機質)、液相(土壤水分或溶液)和氣相(土壤空氣)三相物質四種成分有機地組成。而所有這些組成在土壤微生物的存在下卻能形成一種對作物生長有利,對科研人員非常不利的物質——腐殖質。污泥中也不例外,同樣有腐植酸和富里酸存在。
腐殖質是由一些異養的微生物,如某些腐生細菌,把土壤中的動、植物殘體和有機肥料分解,與礦物質顆粒緊密結合在一起而形成的一種黑色的膠狀物質,是土壤有機質的主要類型,一般占土壤有機質總量的85—90%以上。腐殖質既含有氮、磷、 鉀、疏、鈣等大量元素,還有微量元素;另外在分解過程中還會產生腐殖酸、有機酸、維生素及一些激素等。在水體中,腐殖質主要指腐殖酸和富里酸。實驗證明,微量腐殖酸或富里酸的存在就會導致PCR的失敗!這在眾多公司的提取試劑盒中都有相應說明。
再加上近期土壤污染(肥料、農藥等)的存在,因此導致提取對象成份非常復雜,提取難度也就可想而知。有的公司產品即使有少量的RNA提出,也會造成科研人員后期的實驗不順暢,這樣的例子已司空見慣。因此解決從土壤提取RNA后腐殖質殘留以及其它影響成分的有效去除成了各家公司關注的焦點。
土壤RNA提取試劑盒
目前市場上常見的試劑盒大概有3-4中,這些試劑盒又通常采用玻璃珠(鋼珠)破碎的方法,然后用玻璃奶和吸附柱反復漂洗去除雜質和腐殖酸,操作過程極其復雜,一般需要2.5小時以上的操作時間。使用,可能會因為步驟不熟練,超過4個小時。并且有些操作在常溫進行,這就很難對RNA進行有效保護,結果可能會導致即使有RNA的提出,也不再是完整的RNA片段,造成部分或全部降解。
因此,提取過程耗時短,影響物質(腐殖質等)去除干凈,提取過程RNA穩定才是從土壤中輕松獲取高質量RNA的必要條件。針對這一目標,百泰克公司經過多年的不斷探索,集眾家所長,終于開發了一款非常方便簡單快捷的提取土壤(污泥)中RNA的試劑盒,該試劑盒具有以下特點:
l  操作簡便 
整個過程,操作時間僅需1小時,熟練時,能更快,避免操作時間過長RNA降解
l  破碎方法優良 
采用常見的液氮研磨,既能使RNA處于低溫的保護狀態,不容易降解,又不需要特殊的設備,降低實驗成本。同時還可避免玻璃珠破碎過于劇烈導致的片段機械損傷。另外,玻璃珠破碎一般需要專用儀器,有些試劑盒不買專用儀器沒法使用,而一般的渦旋也很難取得好的破碎效果。
l  新型腐殖酸去除技術 
采用創新的腐殖酸去除技術,短時間內就可達到很好的去除效果
l  不需單獨去除DNA 
操作過程中已經去除DNA,不需另外單加DNA酶再去除DNA的步驟,省時省力。
 
 
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